Для проведения реакции иммунофлюоресценции используется люминесцентный (или флюоресцентный) микроскоп. Этот метод гистологического анализа основан на явлении люминесценции (свечения) веществ при воздействии на них коротковолновых лучей, таких как ультрафиолетовый свет.
Основные аспекты использования люминесцентного микроскопа в иммунофлюоресценции:
Принцип работы:
Препарат предварительно обрабатывается антителами к исследуемому белку, которые мечены флюоресцирующим красителем.
При попадании ультрафиолетовых лучей на клетку, биологические соединения, присутствующие в клетках, начинают светиться.
Типы используемых флюорохромов:
Для исследования содержания в клетках нуклеиновых кислот часто применяются флюорохромы, такие как флюоресцеин, акридин оранжевый и корифосфин.
Например, при окраске акридином ДНК дает красно-зеленое свечение, а РНК — оранжевое.
Необходимая аппаратура:
Люминесцентный микроскоп, оснащенный ультрафиолетовой подсветкой с длиной волны 210-275 нм.
Для защиты зрения исследователя требуется специальная аппаратура — электронно-оптический преобразователь.
Применение:
Люминесцентная микроскопия широко используется для изучения иммунофлюоресценции, что позволяет исследовать содержание очень малых количеств белка в клетках.
Меченые антитела соединяются с соответствующими белками клетки, вызывая специфическое свечение, которое можно наблюдать через микроскоп.
Пример процесса исследования:
Подготовка препарата:
Обработать препарат антителами, мечеными флюоресцирующим красителем.
Освещение ультрафиолетом:
Поместить препарат под люминесцентный микроскоп и осветить ультрафиолетовыми лучами.
Наблюдение и анализ:
Наблюдать за специфическим свечением, которое указывает на наличие и локализацию исследуемого белка в клетке.
Таким образом, люминесцентный микроскоп с ультрафиолетовой подсветкой и возможностью использования флюорохромов является необходимым инструментом для проведения реакции иммунофлюоресценции.
